熒光物質(zhì)測定儀操作流程詳解:
一、樣品準(zhǔn)備與裝載
1.樣品預(yù)處理
根據(jù)樣品類型(液體、固體或薄膜)選擇合適的處理方式:
液體樣品:需過濾去除顆粒物,避免干擾熒光信號(hào);若為高濃度樣品,需用溶劑稀釋至線性檢測范圍內(nèi)。
固體樣品:研磨成均勻粉末后溶解于適量溶劑,或直接壓片制成透明薄片。
生物樣品(如細(xì)胞):需通過裂解液釋放熒光物質(zhì),離心后取上清液。
關(guān)鍵點(diǎn):確保樣品無自發(fā)熒光雜質(zhì)(如某些塑料容器),建議使用石英比色皿或?qū)S脴悠繁P。
2.裝載樣品
打開ZW-3樣品室艙門,將預(yù)處理后的樣品注入專用樣品盤。
關(guān)閉艙門時(shí)避免震動(dòng),防止樣品濺出或位置偏移。
注意事項(xiàng):若測量揮發(fā)性樣品,需在密閉環(huán)境中操作以減少損失。
1.光源選擇與校準(zhǔn)
根據(jù)熒光物質(zhì)激發(fā)波長選擇光源類型:
氙燈:適用于寬波段激發(fā),需預(yù)熱10-15分鐘以達(dá)到穩(wěn)定輸出。
LED光源:波長特異性高,無需預(yù)熱但需確認(rèn)與樣品激發(fā)峰匹配。
調(diào)整光源強(qiáng)度:初始設(shè)置為中等強(qiáng)度,后續(xù)根據(jù)熒光信號(hào)強(qiáng)度微調(diào),避免光漂白或檢測器飽和。
2.檢測器參數(shù)優(yōu)化
靈敏度設(shè)置:
高濃度樣品:選擇低靈敏度檔位,防止信號(hào)溢出。
低濃度樣品:啟用高靈敏度檔位,配合增益調(diào)節(jié)提升信噪比。
積分時(shí)間:根據(jù)熒光衰減特性設(shè)置,長壽命熒光物質(zhì)需延長積分時(shí)間。
校準(zhǔn)步驟:運(yùn)行空白樣品(純?nèi)軇┛鄢尘霸肼?,確保基線穩(wěn)定。
3.波長掃描設(shè)置(可選)
若需分析熒光光譜,設(shè)置激發(fā)波長范圍和發(fā)射波長范圍,儀器將自動(dòng)掃描并生成光譜圖。
三、熒光物質(zhì)測定儀測量與數(shù)據(jù)采集
1.啟動(dòng)測量
在控制軟件中點(diǎn)擊“開始”按鈕,ZW-3將按預(yù)設(shè)參數(shù)執(zhí)行以下操作:
光源激發(fā)樣品,檢測器實(shí)時(shí)采集熒光信號(hào)。
系統(tǒng)自動(dòng)扣除背景噪聲,生成原始數(shù)據(jù)曲線。
動(dòng)態(tài)監(jiān)測模式:對光穩(wěn)定性差的樣品(如某些染料),可設(shè)置連續(xù)測量間隔,觀察熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化。
2.實(shí)時(shí)監(jiān)控與調(diào)整
觀察軟件界面中的熒光強(qiáng)度曲線,若信號(hào)波動(dòng)超過5%,需檢查:
樣品是否均勻分布。
光源是否穩(wěn)定(通過內(nèi)置參考光強(qiáng)計(jì)確認(rèn))。
檢測器是否過熱(需暫停測量冷卻)。
根據(jù)實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)微調(diào)參數(shù)(如降低光源強(qiáng)度或縮短積分時(shí)間)。
四、熒光物質(zhì)測定儀數(shù)據(jù)處理與分析
1.熒光強(qiáng)度計(jì)算
儀器自動(dòng)應(yīng)用預(yù)設(shè)公式計(jì)算結(jié)果。
相對定量:以標(biāo)準(zhǔn)品為參照,計(jì)算樣品相對熒光強(qiáng)度。
多波長分析:對光譜數(shù)據(jù)擬合高斯曲線,確定最大發(fā)射波長和半峰寬。
2.結(jié)果輸出與存儲(chǔ)
打印報(bào)告:選擇“導(dǎo)出”功能生成PDF或Excel文件,包含樣品信息、參數(shù)設(shè)置、熒光曲線及計(jì)算結(jié)果。
數(shù)據(jù)備份:將原始數(shù)據(jù)和處理后的數(shù)據(jù)保存至指定文件夾,建議按日期-項(xiàng)目名分類存儲(chǔ)。
高級(jí)分析:通過配套軟件進(jìn)行動(dòng)力學(xué)擬合(如一級(jí)反應(yīng)速率常數(shù)計(jì)算)或主成分分析(PCA)。
